对于常用的反相色谱柱出现了严重的柱效降低需要考虑再生时，建议大家用以下流程来进行冲洗：

【冲洗流程】

**步：20倍柱体积水：乙腈= 95%：5%

（用于移除系统中缓冲盐，可根据常用缓冲盐浓度调整比例）

**步：20倍柱体积 乙腈 

第三步：5倍柱体积 异丙醇

第四步：20倍柱体积 正己烷

第五步：20倍柱体积 乙腈

20倍柱体积 水：乙腈=95%：5% （可与步骤1保持相同的比例）

第六步：用所需的流动相比例重新平衡色谱柱

关于色谱柱的再生，建议大家可以根据实际需求来选择再生条件。实际上在色谱柱冲洗时，很多实验室习惯用冲洗时间来评价是不是达到我们想要的效果。例如某位师傅告诉你把这个柱子冲半个小时就可以了。

然而色谱柱的冲洗应该使用冲洗的溶剂体积来评价冲洗效果。例如这次提到的20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱是指什么呢？其实柱体积需要按照你使用的色谱柱的内径和柱长来计算。
通过公式就很容易算出柱体积了，

例如一根4.6mm内径，150 mm柱长的色谱柱柱体积为：

如果要用20倍柱体积的乙腈冲洗色谱柱就需要约34mL的乙腈，假设你的柱流量是1mL/min，那就要用乙腈冲洗34分钟。当柱流量是1.5 mL/min时就需要用乙腈冲洗约23分钟。冲洗色谱柱时，色谱柱的尾端不要接检测器，接一个可以收纳废液的容器就行了。