实验室液相色谱仪操作规范

开机前准备

环境要求：实验室温度控制在20-25℃，湿度40%-60%，避免阳光直射与震动干扰

流动相准备：

使用HPLC级试剂，水流动相用0.2μm混合滤膜过滤，有机流动相用有机滤膜过滤

过滤后超声脱气15-20分钟，恢复至室温后使用

含水流动相和不含水流动相的配制用具应区分开

系统检查：

检查仪器各部件连接是否牢固

确保色谱柱安装正确

检查供电电源是否稳定

开机与初始化

按正确顺序开机：先开启仪器电源，再打开电脑和工作站软件

进行系统排气：

打开放空阀，选择快速冲洗模式赶走泵内气泡

排气结束后关闭所有排气阀，避免柱压瞬间升高

设置初始参数：

先用纯有机相冲洗色谱柱20-30分钟

然后设置流动相配比，流速从0.5mL/min开始

观察基线稳定性，确保压力波动在2%以内

样品分析

样品预处理：

样品溶液需过滤(0.22-0.45μm滤膜)确保澄清

固体样品浓度控制在0.2-1.0 mg/mL

生物样品需进行酶解处理

参数设置：

设置流速(通常1mL/min)、流动相组成、进样量(梯度洗脱10μL，等度洗脱可增至20μL)

设置柱温、检测波长等参数

梯度洗脱时确保溶剂互溶，避免析出盐晶体

进样操作：

使用自动进样器或手动进样

每批次分析后用流动相清洗进样针5次

每个样品分析前留5-10分钟清洗前一样品残留

关机与维护

关机顺序：

先关闭检测器和工作站软件

用甲醇等强溶剂冲洗整个色谱系统

待柱压降至正常值后关闭泵和仪器电源

日常维护：

使用含缓冲液后立即用去离子水冲洗管路及柱子1小时

然后用甲醇或甲醇水溶液冲洗40分钟以上

定期检查和更换色谱柱填料、过滤白头等易耗品

长期不用时，用有机相(如甲醇)保存色谱柱，取下并用堵头封好

注意事项

流动相必须现配现用，避免使用纯水冲洗反相C18柱

不能用纯乙腈作为流动相，会导致单向阀粘住

C18柱不能进蛋白样品、血样或生物样品

做好原始记录，包括样品信息、分析参数和结果

仪器出现故障应及时报告专业维修人员，未经培训人员不得维修